一般而言,培养细胞需要无菌环境和支持细胞生长的营养供应。此外,培养环境的pH和温度应该是稳定的。在过去60年中,已经开发出成分确定的各种类型的培养基,现在均可商购获得。最初,平衡盐溶液用于维持哺乳动物心脏组织的收缩性,而Tyrode盐溶液则用于原代哺乳动物细胞。后来,这些原始的配方中添加了氨基酸、维生素、脂肪酸和脂质等营养素而被改良,因此,现代培养基适用于多种类型细胞的生长。精确的培养基配方通常通过优化每种成分的浓度来实现。下面给出了默克细胞培养基的种类有哪些?
按照细胞培养基的发展历史,细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。
1、DMEM细胞培养基(DML09)
DMEM是在MEM培养基的基础上改良获得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。
2、神经元基础培养基(MEP01)
可为神经元生长提供基础营养物质。
3、IPL-41昆虫培养基(IPP02)
IPL-41昆虫培养基旨在用于大规模扩增草地贪夜蛾细胞系,也常用于通过杆状病毒表达系统进行蛋白表达。IPL-41培养基是对原始IPL配方的改良,由美国农业部昆虫病理实验室Weiss等人开发,用于大规模扩增草地贪夜蛾衍生细胞系。Weiss向基础培养基中加入了胎牛血清和TPB培养基,成功地实现了IPL-21AE(III)细胞系的大规模连续培养。
该培养基主要用于培养和维护鳞翅类衍生细胞系和扩增这些细胞系的病毒。IPL-41培养基基础也以用于无血清夜蛾细胞的杆状病毒重组蛋白表达。
1.1平衡盐溶液
BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。
目前用于细胞培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
1.2合成细胞培养基
合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合工设计、配制的培养基开发的基础培养基,其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。
培养基的制备
虽然成分确定的任何培养基可以由其组成成分制成,但对于大多数进行细胞培养的实验室来说,这样做很耗时,并且可能增加污染的风险。为方便起见,许可常用的培养基都是预混粉末或10x和1x液体培养基。我们的网上产品目录列出了所有常用培养基。如果使用的是粉末或10x培养基,用来溶解粉末或稀释浓缩液体的水是组织培养级的,不得含有矿物质、有机物和微生物污染物,包括热原质。在大多数情况下,通过逆渗滤和树脂滤芯等纯化技术生产的、最终电阻为16-18MΩ的水是合适的。制备完成后,应正确调节培养基的pH,然后使用Stericup过滤装置对培养基进行过滤除菌,才能使用。