基于Ficoll-Paque产品的细胞分离可在宽泛的血液样品体积中进行。由于其高产率，该方法可适用于处理极少量的血液，例如从儿童获得的样品。为了获得高分离可重复性，建议使用标准化操作步骤。以下操作步骤通过了我们的实验室使用Ficoll-Paque PLUS的评估并建议用于正常血液样本的分离，经过简单的更改即可适应特定的离心系统。该步骤也非常适合采用Ficoll-Paque PREMIUM、Ficoll-Paque PREMIUM 1.084以及Ficoll-Paque PREMIUM 1.073进行细胞分离。
为了建立标准化步骤，应先选择离心管的血容量和直径。这些因素决定了血液样本在管中的高度，进而决定了离心时间。增加管中血样的高度会增加红细胞的污染。然而分离却不会因为管直径的改变而受到明显影响。因此，在管中血样的高度和分离时间保持不变的情况下，管径越大，相同的纯化程度下分离体积就越大。
单核细胞的产量和纯化程度很大程度取决于红细胞的去除效率。
当全血中的红细胞发生聚集时，一些单核细胞会被捕获在团块中而与红细胞一同沉淀。这种单核细胞捕获的倾向性可通过稀释血液来减少。稀释有利于提高单核细胞产量并降低红细胞团块的大小。红细胞的聚集在较高温度（37℃）下会增强，从而会降低单核细胞的产量。然而在较低温度（4°C）下，聚集速率减低但会增加分离时间，这也会使得单核细胞的产量发生降低。折衷温度在18C至20°C中间可获得最佳效果。
自备设备和溶液
无菌平衡盐溶液或其他标准盐溶液。
带有水平转子的离心机（应关闭制动）。
无菌离心管和移液器。
无菌针头和注射器。
相应选择的红细胞裂解液（如果分离粒细胞）。
试剂制备
稀释及洗涤液
用于血液稀释和细胞洗涤的平衡盐溶液可按照以下指南进行制备。其他的稀释液和洗涤液如等压无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（如杜氏PBS）、盐溶液（如Hank）或细胞培养培养基（如RPMI 1640）也可使用。
平衡盐溶液
在进行平衡盐溶液制备时，将一份体积的储存液A与九份体积的储存液B混合后进行灭菌。至少20 ml的每个样本需要被处理。可能也会用到其他无菌的标准盐溶液。
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