PCR操作方法
标准聚合酶链式反应(PCR)设置包括四个步骤：
向PCR管中添加所需的试剂或预混液和模板。
混合并离心。
*添加矿物油可防止在无加热盖的热循环仪中蒸发。
按照热循环仪和引物参数扩增。
先后通过琼脂糖凝胶电泳和溴乙锭染色，评估扩增的DNA。
下面将详细介绍这些步骤以及对应的材料和试剂选择要点。以下为使用Taq DNA聚合酶进行的基本PCR方案。
什么是TAQ聚合酶？
Taq DNA聚合酶是一种来自嗜热细菌栖热水生菌的热稳定酶。其在PCR常用于扩增DNA片段。该酶是重组形式，在大肠杆菌中表达。它能够承受反复加热至95°C（PCR技术强制要求）而不会显著损失活性。通过SDS-PAGE测定，该酶约为94 kDa，没有可检测的核酸内切酶或核酸外切酶活性。它具有5'→3'DNA聚合酶活性以及5'→3'核酸外切酶活性。每批Taq DNA聚合酶都经过PCR扩增和双链测序测试。该酶以5单位/μL供应，并配有优化的10x反应缓冲液。
标准Taq DNA聚合酶
请根据下表选择适合您反应条件的Taq DNA聚合酶混合物。可选择有/无氯化镁(MgCl2)的透明或红色染料配方，预配制readymix，或包含缓冲液和dNTP的预混液。
网址：https://www.pschina66.com/
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